Frecuencia de ADN de los principales tipos de virus oncogénicos en la estructura del cáncer de células escamosas y la mucosa normal de la cavidad bucal
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Resumen
Relevancia. La incidencia de neoplasias malignas en la mucosa de la cavidad oral, y lo más importante, la mortalidad por esta patología, sigue siendo significativa en Rusia. En este sentido, la búsqueda de factores pronósticos y predictivos informativos es una tarea relevante para los especialistas que se dedican al tratamiento de tumores de la mucosa de la cavidad oral.
Objetivo. Determinar la frecuencia de detección de ADN de virus oncogénicos en la mucosa normal y en focos de carcinoma de células escamosas de la mucosa de la cavidad oral.
Materiales y métodos. Se realizó un estudio prospectivo que incluyó a 50 voluntarios sanos y 116 pacientes con carcinoma de células escamosas de la mucosa de la cavidad oral verificado por primera vez. A todos los examinados se les realizó la detección de ADN de VPH I, II tipos, CMV, EBV, VPH-6, 11 tipos, VPH-16 y VPH-18 tipos mediante PCR en tiempo real.
Resultados. Se identificó una frecuencia significativamente menor de ADN del VPH-18 en pacientes con cáncer de células escamosas en comparación con la mucosa normal (el VPH-18 se detectó 2,8 veces menos a menudo (p < 0,0001)). En la estructura del cáncer de células escamosas y la mucosa normal de la cavidad oral, se encontró una asociación significativamente más frecuente de la mucosa normal de la cavidad oral con el VPH-18, tanto en monoasociación – 19 (18,0%) de los sujetos en el grupo de control en comparación con el grupo principal – 6 (5,2%) (p=0,008), como en combinación con el virus de Epstein-Barr: 7 (14,0%) (grupo de control) en comparación con 5 (4,3%) (grupo principal) (p = 0,03). También se obtuvieron diferencias significativas al analizar la combinación del VPH-18 con el citomegalovirus, que se detectó solo en el grupo de control – 2 (4,0%) (p = 0,03).
Conclusión. El análisis realizado sugiere que la presencia de ADN del VPH, tipo 18, en las células del cáncer de células escamosas de la mucosa de la cavidad oral puede ser un factor de curso favorable de la enfermedad.
La incidencia de neoplasias malignas de la mucosa de la cavidad oral, y lo más importante, la mortalidad por esta patología, sigue siendo significativa tanto a nivel mundial como en Rusia en particular. Según datos del MNIIOI nombrado en honor a P.A. Hertzen (filial de FGBU "NMIC de Radiología" del Ministerio de Salud de Rusia), la mortalidad anual por esta patología (según datos de 2017) se aproxima al 50% de todos los casos de enfermedad diagnosticados por primera vez. La formación morfológica del foco de cáncer de células escamosas en la mucosa de la cavidad oral es un proceso complejo y multietapa, y los factores etiológicos fundamentales para su desarrollo son el tabaquismo, el abuso de alcohol y la higiene bucal inadecuada, que afectan negativamente la estructura de la mucosa normal, especialmente en personas con predisposición genética al desarrollo de oncopatología. Además de los factores de riesgo bien conocidos para el desarrollo del cáncer de células escamosas de la mucosa de la cavidad oral y las enfermedades precoces registradas, existe toda una serie de factores, como infecciones virales e inflamación, que pueden ser un eslabón importante en el patogénesis de las enfermedades malignas y pueden potenciar el desarrollo del 15-20% de las neoplasias malignas.
Objetivo de la investigación
Determinar la frecuencia de detección de ADN de los virus del herpes simple tipo I y II (VHS-I,II), citomegalovirus (CMV), virus de Epstein-Barr (VEB) y virus del papiloma humano tipos 6, 11, 16 y 18 (VPH-6,11, VPH-16, VPH-18) en la mucosa normal de la cavidad oral y en focos de carcinoma de células escamosas de la mucosa de la cavidad oral.
Materiales y métodos de investigación
Para alcanzar el objetivo propuesto, se realizó un estudio prospectivo que incluyó a 50 voluntarios sanos (grupo de control) que estaban bajo observación en la clínica de cirugía maxilofacial y plástica de la GBOU VPO SPbGMU nombrada en honor al académico I.P. Pavlov durante el período de 2012 a 2013, y 116 pacientes (grupo principal) a quienes se les verificó por primera vez el diagnóstico de "carcinoma de células escamosas de la mucosa de la cavidad oral" en el SPb GBUZ "Dispensario Oncológico Clínico Municipal" durante el mismo período. El período total de observación se extendió hasta el 17.07.2019, después de lo cual se realizó el análisis final de los datos.
Criterios principales para la inclusión de pacientes con cáncer de células escamosas de la mucosa oral en el estudio:
Firma del formulario de consentimiento informado voluntario para participar en el estudio.
Edad, mayor de 18 años.
Verificación morfológica del diagnóstico de "cáncer de células escamosas de la mucosa oral".
Criterios principales para la no inclusión de pacientes con cáncer de células escamosas de la mucosa oral en el estudio:
Metástasis a distancia detectadas de cáncer de células escamosas de la mucosa oral.
Criterios principales para la inclusión en el grupo de voluntarios sanos:
Firma del formulario de consentimiento informado voluntario para participar en el estudio.
Edad, mayor de 18 años.
Ausencia de enfermedades registradas en el momento de la inclusión en el estudio de la mucosa oral de carácter inflamatorio, tumoral u otro.
Criterios principales de exclusión del grupo de voluntarios sanos:
Verificación histológica del diagnóstico de "cáncer de células escamosas de la mucosa de la cavidad oral".
Descripción general de los pacientes con cáncer de células escamosas de la mucosa de la cavidad oral.
En el grupo principal había 77 hombres (66,38 %) y 39 mujeres (33,62 %). La edad media de los pacientes fue de 60,80 ± 0,96 años (IC del 95 % 58,90-62,70).
En 49 (42,24%) pacientes, el foco tumoral primario se localizó en la región de la parte anterior y media de la lengua, en 32 (27,60%) estaba la mucosa del fondo de la cavidad oral. La mucosa de la parte alveolar de la mandíbula inferior fue afectada en 8 (6,90%) pacientes, la mejilla en 7 (6,03%) pacientes. Con menos frecuencia se afectaron el arco palatino anterior y la mucosa del pliegue pterigomandibular en 3 (2,59%) pacientes, el proceso alveolar del maxilar superior, la región retromolar y el paladar duro en 2 (1,72%) pacientes, y el paladar blando y el labio inferior en 1 (0,86%) paciente, respectivamente.
Las etapas tempranas de la enfermedad (0, I y II) fueron diagnosticadas en 24 (20,69%) pacientes (1,72%, 5,17% y 13,80% respectivamente). En 18 (15,52%) pacientes se identificó la etapa III de la enfermedad, y más de la mitad de los pacientes – 68 (58,62%) se presentaron inicialmente con la etapa IVA. En 6 (5,17%) pacientes, el tumor primario fue considerado inoperable (T4b) o la afectación de los ganglios linfáticos regionales superó los 6 cm (N3) – etapa IVB.
El estudio histológico realizado reveló que en 35 (30,17%) la diferenciación del tumor fue alta (G1), en 34 (29,31%) fue moderada (GII), y en 13 (11,21%) pacientes el grado de diferenciación del tumor fue bajo (GIII). En un tercio de los casos – 34 (29,31%) – el grado de diferenciación no fue determinado.
En 51 (43,97%) casos se identificaron signos histológicos de queratinización, en 29 (25,00%) casos el tumor no presentaba signos de queratinización, en 5 (4,31%) el grado de queratinización fue determinado como parcial, y en 31 (26,72%) muestras la presencia de queratinización no fue evaluada.
Característica general de los voluntarios sanos.
El grupo de voluntarios sanos estuvo compuesto por 30 (60,0%) hombres y 20 (40,0%) mujeres. La edad media fue de 55,7 años (95% IC 47,60-61,35).
34 (68,0%) encuestados acudieron a consulta por implantación dental, 12 (24,0%) encuestados requirieron preparación quirúrgica para tratamiento ortodóntico y 4 (8,0%) encuestados fueron consultados sobre retención/distopía dental. Los grupos formados fueron comparables en indicadores demográficos: sexo y edad.
Método de detección de ADN de virus mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en tiempo real.
La recolección de material se realizó bajo anestesia local por infiltración de tumores primarios en pacientes con carcinoma de células escamosas de la mucosa oral y encías de la mandíbula superior o inferior de voluntarios sanos; el tamaño de la muestra fue de 0,5 x 0,5 cm. Después de la recolección, la muestra se fijó en una solución de ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) y se congeló a una temperatura de -25 °C.
La detección de ADN viral se realizó mediante la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (Laboratorio de diagnóstico molecular GBOU VO PsPbGMU im. I.P. Pavlova). Para la detección cualitativa de ADN se utilizaron kits de diagnóstico especializados, de acuerdo con las instrucciones de los fabricantes. La sensibilidad de los métodos de PCR era estándar de 102 copias genómicas en una muestra.
Metodología de análisis estadístico.
Las variables que reflejan características se analizaron mediante estadística descriptiva. Con el fin de determinar las categorías descriptivas utilizadas para las variables cuantitativas, se evaluaron en cuanto a la normalidad de la distribución utilizando la prueba de Shapiro-Wilk. En todos los casos, los datos obtenidos se ajustaron a una distribución normal, por lo que su descripción se realizó mediante la media muestral y el error medio (M ± m). La comparación de grupos de sujetos en cuanto a la frecuencia de aparición de la característica se llevó a cabo utilizando el criterio z (con la corrección de Yates por continuidad). Todos los indicadores se calcularon con un intervalo de confianza (IC) del 95% bilateral y un valor de "p" bilateral. El procesamiento estadístico se realizó utilizando el paquete de programas aplicados Statistica® (StatSoft, ver. 12.0) y MedCalc® (ver. 19.0.7).
Resultados del análisis de la frecuencia de detección de ADN de virus mediante PCR en tiempo real
El análisis realizado permitió establecer que la frecuencia de ausencia de ADN viral en ambos grupos fue la misma, en 54 (46,6%) pacientes del grupo principal no se detectó ADN viral en la estructura del tumor, mientras que en el grupo de control el ADN viral estaba ausente en 17 (34,0%) de los examinados (p = 0,13). En el resto de la cohorte examinada, se registró significativamente más frecuentemente el ADN del virus de Epstein-Barr (VEB) en 40 (34,48%) pacientes del grupo principal (p < 0,0001) y en 15 (30,00%) voluntarios sanos (p = 0,03). El carcinoma de células escamosas de la mucosa de la cavidad oral se asoció significativamente más con el ADN de los virus del papiloma humano, tanto en general en 48 (41,4%) casos (p < 0,0001), como por subtipos considerados: VPH-6,11 – 16 (13,8%) (p = 0,005), VPH-16 – 12 (10,3%) (p = 0,001), VPH-18 – 20 (17,2%) (p < 0,0001). En el grupo de control, el ADN del VPH se detectó significativamente más frecuentemente solo en general – 27 (54,0%) (p < 0,0001), y en VPH-18 – 24 (48,0%) (p < 0,0001).
El análisis comparativo realizado sobre la frecuencia de registro del ADN viral en ambos grupos permitió identificar los siguientes resultados, presentados en la tabla 1.
En el transcurso de nuestra investigación se identificó una frecuencia significativamente mayor de ADN del VPH-18 en las células de la mucosa oral de voluntarios sanos en comparación con los pacientes con cáncer de células escamosas; en el grupo de control, el VPH-18 se detectó 2,8 veces más a menudo (p < 0,0001).
Sin embargo, es importante entender que el ADN de solo un tipo de virus en el grupo principal se detectó solo en un tercio de los pacientes: 34 (29,3%), mientras que en el grupo de control se encontró en 19 (38,0%) de los examinados (p = 0,14). Dos tipos de ADN viral también se registraron con la misma frecuencia tanto en el grupo principal – 24 (20,7%) – como en el grupo de control – 14 (28,0%) (p = 0,16). La asociación de tres o cuatro tipos de ADN viral se encontró solo en pacientes con cáncer de células escamosas de la mucosa oral – 3 (2,6%) y 1 (0,9%) (p = 0,26) (tabla 2).
Los resultados del subanálisis de combinaciones de virus en la estructura del carcinoma de células escamosas y la mucosa normal de la cavidad oral revelaron una asociación significativamente más frecuente de la mucosa normal de la cavidad oral con VPH-18, tanto en monoasociación – 19 (18,0%) de los sujetos en el grupo de control en comparación con el grupo principal – 6 (5,2%) (p = 0,008), como en combinación con el virus de Epstein-Barr: 7 (14,0%) (grupo de control) en comparación con 5 (4,3%) (grupo principal), (p = 0,03). También se obtuvieron diferencias significativas al analizar la combinación de VPH-18 con citomegalovirus, que se detectó solo en el grupo de control – 2 (4,0%) (p = 0,03). Por otro lado, la combinación de EBV con VPH-16 se registró solo en 6 (5,2%) pacientes con carcinoma de células escamosas de la mucosa de la cavidad oral, con una tendencia a una mayor frecuencia de esta combinación (p = 0,1).
Discusión
Nuestro análisis realizado permitió demostrar de manera significativa que la ausencia de asociación de la mucosa de la cavidad oral se presenta con la misma frecuencia tanto en la mucosa no alterada como en los focos de carcinoma de células escamosas, lo que permite hablar de la comparabilidad de los pacientes considerados.
En el transcurso de la investigación, registramos una mayor frecuencia de detección del ADN del virus del papiloma humano tipo 18 en la estructura de la mucosa oral normal, tanto en monoasociación como en combinación con otros tipos de virus (EBV, CMV). Investigaciones similares y resultados parecidos, principalmente en relación con el VPH-18, fueron obtenidos, por ejemplo, por Yeudall W. A. y Campo M. S. (Reino Unido) en 1991: mediante PCR analizaron 25 muestras de mucosa oral normal, en el 8% de las cuales se logró detectar ADN del VPH-18, mientras que en la estructura del carcinoma de células escamosas, el ADN del VPH-18 se detectó en el 20,5% de los casos de 39 examinados. Sin embargo, los datos de la literatura son ambiguos: por ejemplo, Saghravanian
N. y sus coautores (Irán) en 2011 analizaron 18 muestras de mucosa normal y 21 muestras de carcinoma de células escamosas de la mucosa oral y encontraron que en la mucosa no alterada no se detectó ADN del VPH-16 y VPH-18 en ninguna muestra, mientras que en los focos de carcinoma de células escamosas hubo 3 (14,3%) análisis positivos para estos tipos de virus. En 2017, Liu T. y sus coautores (China) mediante análisis inmunohistoquímico analizaron la frecuencia de asociación de 22 muestras de mucosa oral normal y en 6 muestras de carcinoma de células escamosas con VPH 16 y 18, donde el ADN de los virus se detectó en el 62,5% de los casos del grupo de voluntarios sanos y en todos los 6 (100%) pacientes con oncopatología. Los resultados de nuestra investigación muestran de manera confiable que el carcinoma de células escamosas de la mucosa oral está más asociado con el ADN de los virus del papiloma humano, tanto en general en el 41,4% (48) de los casos, como por subtipos virales individuales: VPH-6,11 – 13,8%, VPH-16 – 10,3%, VPH-18 – 17,2%, mientras que en la mucosa normal el ADN del VPH se detectó de manera significativamente más frecuente solo en conjunto – 54,0% y en el caso del tipo VPH-18 – 48,0%, en comparación con otros subtipos que se encontraron con mucha menos frecuencia.
Las investigaciones rusas dedicadas a la cuestión en cuestión son extremadamente escasas, se puede decir que son aisladas, y el número de pacientes examinados en estas investigaciones es reducido. Uno de los estudios más recientes es el trabajo de Kiryanov S. A. y sus coautores, presentado a finales de 2019: los autores examinaron a 10 pacientes con carcinoma de células escamosas de la mucosa oral en busca de ADN del VPH y del VEB mediante la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real, y encontraron que el ADN del VPH no se detectó en ninguna muestra de tejido tumoral, mientras que el ADN del VEB se identificó en 7 (70,0%) casos. En nuestra investigación, el ADN del virus de Epstein-Barr (VEB) se detectó solo en el 34,48% (40) de los pacientes con carcinoma de células escamosas de la mucosa oral y en el 30,00% (15) de los voluntarios sanos.
El análisis de los datos obtenidos permite suponer que la detección del ADN del VPH tipo 18 en las células del carcinoma de células escamosas de la mucosa oral puede ser un factor de curso favorable de la enfermedad, y los índices de supervivencia y la eficacia del tratamiento oncológico en esta cohorte de pacientes prevalecerán sobre los índices similares de los pacientes negativos para VPH-18. Así, la realización de nuestra investigación en un material clínico significativo, posiblemente, permitirá ver de una nueva manera a los virus como un factor etiológico confiable en el desarrollo del carcinoma de células escamosas de la mucosa oral. Creemos que se debe prestar especial atención a la asociación del carcinoma de células escamosas de la mucosa oral con el VPH-18, como un probable factor etiológico en el desarrollo de la transformación maligna de las estructuras de la mucosa oral. Sin embargo, sin duda, se requiere un estudio más profundo de esta cuestión, con el objetivo de determinar el verdadero papel del factor viral en el desarrollo y curso del carcinoma de células escamosas de la mucosa oral.
Kutukova S.I., Chukhlovin A.B., Yaremenko A.I., Ivaskova Y.V., Razumova A.Y., Ermakova T.S.
Lista de referencias
Estado de la atención oncológica a la población de Rusia en 2018. Ed. A. D. Kaprina, V. V. Starinsky, G. V. Petrova. Moscú: MNII im. P.A. Herzen – una sucursal de la Institución Federal Presupuestaria Científica Centro de Investigación en Radiología del Ministerio de Salud de Rusia, 2019. ill. 236. ISBN 978-5-85502-250-6. [The status of cancer care for the population of Russia in 2018. Ed. A. D. Kaprina, V. V. Starinsky, G. V. Petrova. Moscow: MNII them. P.A. Herzen – a branch of the Federal State Budgetary Institution Scientific Research Center for Radiology of the Russian Ministry of Health, 2019. ill. 236. ISBN 978-5-85502-250-6. (In Russ.)].
Y. K. Chen, H. C. Huang, L. M. Lin, C. C. Lin. Carcinoma de células escamosas orales primarias: un análisis de 703 casos en el sur de Taiwán. Oral Oncol. 1999;35:173-179. https://doi.org/10.1016/s1368-8375(98)00101-8.
P. A. Reichart. Identificación de grupos de riesgo para el precáncer y cáncer oral y medidas preventivas. Clin Oral Investig. 2001;5:207-213. https://doi. org/10.1007/s00784-001-0132-5.
J. H. Meurman. Factores de riesgo infecciosos y dietéticos del cáncer oral. // Oral Oncol. 2010;46:411-413. https://doi.org/10.1016/j.oraloncology.2010.03.003.
W. A. Yeudall, M. S. Campo. ADN del virus del papiloma humano en biopsias de tejidos orales. Journal of General Virology. 1991;72:173-176. https://doi. org/10.1099/0022-1317-72-1-173.
N. Saghravanian, K. Ghazvini, S. Babakoohiet et al. Baja prevalencia de genotipos de alto riesgo del virus del papiloma humano en mucosa oral normal, leucoplasia oral y carcinoma verrucoso. Acta Odontologica Scandinavica. 2011;69:406-409. https://doi.org/10.3109/00016357.2011.572560.
T. Liu, H. Zhang, X. Yang et al. Estudio sobre la expresión de p16 y del virus del papiloma humano 16 y 18 (E6) en OLP y su transformación maligna. Patología – Investigación y Práctica. 2018;214(2):296-302. https://doi. org/10.1016/j.prp.2017.09.014.
Kiryánov S. A., Levina T. A., Polyakov A. P., Rebrikova I. V., Murashko D. A., Konopleva M. V., Semenenko T. A., Suslov A. P. Detección del ADN genómico del virus de Epstein-Barr en tejidos de cáncer de la mucosa oral de pacientes rusos. Cuestiones de virología. 2019;64(3):112-117. https://doi. org/10.18821/0507-4088-2019-64-3-112-117. [S. A. Kiryanov, T. A. Levina, A. P. Polyakov, I. V. Rebrikova, D. A. Murashko, M. V. Konopleva, T. A. Semenenko, A. P. Suslov. Detection of Epstein-Barr virus genome in oral cavity squamous cell carcinoma samples of Russian patient. Problems of Virology, Russian journal. 2019;64(3):112-117. (In Russ.)]. https://doi.org/10.18821/0507-4088-2019-64-3-112-117.